Tartalom
- Fő különbség
- Southern blotting vs. Western blotting
- Összehasonlító táblázat
- Mi a Southern blotting??
- Mi a Western blotting??
- Főbb különbségek
- Következtetés
Fő különbség
A fő különbség a Southern blotting és a Western blotting között az, hogy a Southern blotting egy olyan módszer, amelyet egy adott mintában egy specifikus DNS-fragmentum kimutatására használnak, míg a Western blottingot egy adott mintában lévő specifikus fehérje meghatározására használják.
Southern blotting vs. Western blotting
A blotolás olyan módszer, amelyet a tudósok különféle típusú molekulák elválasztására használnak egy keverékből vagy mintából. Ebben a technikában a makromolekulák, például a nukleinsavak (DNS és RNS) és a keverékben levő proteinek mozognak egy géllapon. Itt a perc részecskék gyorsabban mozognak, mint a nagyobbik. Ezeket a molekulákat egy rögzített membrán felületéhez nyomják, amely a molekulákat a membránra továbbítja. Különböző típusú blotok vannak a specifikus anyag kimutatása alapján, azaz a déli blot, az északi blot és a Western blot. A déli blotolás az a blotolás, amelyet a DNS kimutatására használnak, míg a nyugati blotot a fehérje kiderítésére használják. A déli blotot Edward M. Southern fejlesztette ki 1975-ben. Szóval, déli blotolásnak nevezik. Másrészről, a Western-blotot George Stark csoport fejlesztette ki a Stanfordi Egyetemen 1979-ben. Ezt a nevet használták a déli blotoláshoz. A Southern blotot egy specifikus DNS-szekvencia kiderítésére használják, míg a Western-blotot egy specifikus aminosav- vagy proteinszekvencia kiderítésére használják.
Összehasonlító táblázat
| Southern blotting | Western blotting |
| Az a módszer, amelyet egy adott keverékben egy specifikus DNS-szekvencia kiderítésére használnak, déli blotolásnak nevezik. | Az a technika, amelyet egy adott keverékben a protein specifikus aminosav-szekvenciájának kiderítésére használnak, Southern blot néven ismert. |
| Által kifejlesztett | |
| A déli blotot Edward M. Southern dolgozta ki 1975-ben. | A Western blotot George Stark csoportja fejlesztette ki a Stanfordi Egyetemen 1979-ben. |
| A detektálás típusa | |
| A Southern-blotot egy specifikus DNS-szekvencia kiderítésére használják. | A Western-blotot egy specifikus aminosav- vagy proteinszekvencia kiderítésére használják. |
| Elv | |
| A hibridizáció elvén működik. | Az immundetektációs módszer vagy az antigén-antitest kölcsönhatás elvén működik. |
| Szonda | |
| Egyszálú DNS-t vagy néha RNS-t használunk próbaként. | Primer és másodlagos antitesteket alkalmazunk próbaként. |
| Gél elektroforézis | |
| Az agaróz gélelektroforézist alkalmazzuk a Southern blotban. | SDS PAGE / Poliakrilamid gél a fehérjék elválasztására Western blotban |
| Blotting eljárás | |
| A Southern-blot a kapilláris transzfer eljárást követi. | A Western Blotting az elektromos transzfer eljárást követi. |
| Minta | |
| A déli blotolás során a mintát denaturálni kell. | A nyugati blotolás során a mintának natív állapotában kell lennie. |
| blokkolása | |
| A déli foltokban egyetlen olyan lépés sem jár, mint a blokkolás. | A nyugati blotolás során a nem specifikus ellenanyag-helyeket blokkolják a nitrocellulózpapíron tejpor vagy szarvasmarha-szérumalbumin (BSA) segítségével. |
| Címkézési módszerek | |
| A déli foltokban alkalmazott általános címkézési módszerek a kromogén festékek vagy radioaktív címkézés vagy fluoreszcens címkézés stb. | A Western blotban alkalmazott címkézési módszerek fluoreszcensen jelölt antitestek vagy radioaktív jelölések, kromogén festékek vagy diaminobenzidin képződése stb. |
| Kimutatási módszerek | |
| A fény detektálását, az autoradiográfiát és a színváltozást detektálási módszerként használják a déli blotolás során. | A Western blot-ban alkalmazott detektálási módszerek a színváltozás és a fény detektálása stb. |
| Alkalmazás | |
| A Southern blotot a DNS kimutatásában, az apasági vizsgálatban, a DNS ujjazásában, az áldozatok azonosításában, a bűnözők azonosításában, a fertőző kórokozók megtalálásában, a mutáció vagy a génátrendezés azonosításában stb. | A Western-blotot arra használják, hogy megtalálják a keverékben lévő fehérjék számát, felfedezzék a HIV, vírus, baktériumok stb. Jelenlétét a szérumban, megvizsgálják a hibás fehérjéket, és egyértelműen alkalmazzák a herpesz, hepatitis B, Lyme esetében. és Creutzfeldt-Jacob-kór stb. |
Mi a Southern blotting??
A déli blotolás a legrégebbi blotolási módszer, amelyet Edwin Southern adott, és ezt déli blotolásnak nevezték el. Arra szolgál, hogy megtudja, egy adott mintában vagy keverékben a DNS egy adott szekvenciája legyen. A déli blotolás során felmerülő lépések az elektroforézis, transzfer és a specifikus szekvenciák kimutatása. Mindenekelőtt a DNS-t specifikus restrikciós enzim segítségével fragmentálják. Ezután a kívánt DNS-fragmenseket elválasztjuk gélelektroforézissel. Ezeket a fragmenseket lúgos oldat, például NaOH stb. Segítségével denaturáljuk, hogy elkülönítsük a két DNS-szálat. Ezeket az egyszálú DNS-fragmenseket azután a membránon továbbítják a blotolás során. Ezt a membránnal határolt DNS-t ezután jelölt próbával kezeljük. Ez a próba a membrán DNS-jén lévő komplementer szálához kapcsolódik, amelyet autoradiogrammal láthatunk el stb.
Mi a Western blotting??
A Western blotting módszert George Stark csoportja fedezte fel a Stanfordi Egyetemen, amelyet a fehérje aminosav-specifikus szekvenciájának azonosítására használnak. Protein blot vagy immunblot néven is ismert. A Western-blotolás során az elektroforézis, a transzfer és a specifikus fehérjék kimutatása található. Először homogenizáljuk a keveréket. Ezután elektroforézissel szétválasztani a kérdéses molekulát. Vigyük át ezeket a molekulákat a membránra, és specifikus próba segítségével azonosítsuk a specifikus fehérjét.
Főbb különbségek
- Az a módszer, amelyet egy adott keverékben egy specifikus DNS-szekvencia kiderítésére használnak, déli blottel, míg egy technika, amelyet egy adott keverékben a protein specifikus aminosav-szekvenciájának kiderítésére alkalmaznak, déli blotolásnak nevezik.
- A déli blotot Edward M. Southern fejlesztette ki 1975-ben, az úgynevezett déli blotolásnak. Másrészt a Western blotot George Stark csoport fejlesztette ki a Stanfordi Egyetemen 1979-ben.
- A Southern-blotot egy specifikus DNS-szekvencia kiderítésére használják. Ezzel szemben a Western blotot egy meghatározott aminosav vagy fehérje szekvencia kiderítésére használják.
- A Southern blotting a hibridizáció elvén működik a flip oldalán; A Western blot az immundetektációs módszer vagy az antigén-antitest kölcsönhatás elvén működik.
- Az egyszálú DNS-t vagy néha RNS-t használnak próbaként a másik oldal déli blotolásában, a Western-blotban primer és szekunder antitesteket használnak próbaként.
- Az agarózgél-elektroforézist a déli blotban, míg az SDS PAGE / poliakrilamid-gélt a fehérjék elválasztására használják a Western-blotban.
- A Southern blotolás viszont a kapilláris transzfer eljárást követi; A Western Blotting az elektromos transzfer eljárást követi.
- A déli blotolás során a mintát denaturálni kell, míg a nyugati blotolás során a mintának natív állapotában kell lennie.
- A flip oldalán a déli blotolással egyetlen olyan lépés sem jár, mint a blokkolás, a Western blotolás során a nem-specifikus antitest helyeket blokkolják a nitrocellulózpapíron tejpor vagy szarvasmarha-szérumalbumin (BSA) segítségével.
- A déli blotolásban alkalmazott általános címkézési módszerek a kromogén festékek vagy a radioaktív címkézés vagy a fluoreszcens címkézés stb. Használata, míg a Western blotban alkalmazott címkézési módszerek fluoreszcensen jelölt antitest vagy radioaktív címkézés, kromogén festékek vagy diaminobenzidin képződése stb.
- A fény detektálását, az autoradiográfiát és a színváltozást detektálási módszerként alkalmazzák a déli blotokban, míg a nyugati blotokban a detektálási módszerek a színváltozások és a fény észlelése stb.
- A Southern-blotot a DNS-kimutatásban, az apasági tesztekben, a DNS-ujjazásban, az áldozatok azonosításában, a bűnözők azonosításában, a fertőző kórokozók megtalálásában, a mutációk vagy a génrendeződések azonosításában stb. Fordítva. keverék, a HIV, vírus, baktériumok stb. jelenlétének kimutatására a szérumban, a hibás fehérjék felkutatására, és határozottan alkalmazható herpesz, hepatitis B, Lyme-kór és Creutzfeldt-Jacob-kór stb. esetén.
Következtetés
A fenti megbeszélés összefoglalja, hogy a déli blotolás a legrégebbi blot-módszer, amelyet a mintában levő specifikus DNS-szegmens kiderítésére használtak, míg a Western blot-ot felfedezték az utóbbi során, és az aminosavak egy adott szekvenciájának vagy egy specifikus proteinnek az azonosítására szolgál.
